Comment obtenir enzymatiquement modifié Stevia Glucosyl Stevia?

1 préface

Depuis près d’un demi-siècle, les scientifiques se sont engagés à trouver des édulcorants ayant un goût similaire au saccharose mais avec une valeur énergétique plus faible pour remplacer le saccharose afin de réduire la survenue de l’obésité et les trois hauts (hypertension artérielle, glycémie élevée, lipides élevés dans le sang). Actuellement, les édulcorants artificiels comprennent l’acésulfame, l’alitame, l’aspartame, le cyclamate, le sucralose, le néotame, etc. Avec l’amélioration continue du niveau de vie, les gens ont commencé à rechercher des aliments naturels et verts. La Stevia se distingue des édulcorants naturels. Sa douceur est de 250 à 400 fois celle du saccharose. La stévia est extraite de l’herbe Stevia rebaudiana Berton de la famille des astéracées. Ses principaux composants sont les métabolites secondaires stévioside (ST) et rébaudioside A (RA) accumulés dans les feuilles de la plante (voir Figure 1 pour la structure chimique). Comme les métabolites secondaires stévioside (ST) et rébaudioside A (RA) (voir Figure 1 pour la structure chimique).

La recherche sur le stévioside a commencé au début du siècle dernier. À ce jour, il y a eu plus de 1000 articles scientifiques et brevets sur le stévioside dans le monde entier, dont la plupart se centrent sur les techniques d’extraction du stévioside, l’amélioration du goût et les études de sécurité et de toxicologie basées sur des échantillons in vivo. Dans le passé, l’innocuité de la consommation de stevia était controversée en raison de données incomplètes sur la toxicologie humaine et le métabolisme, et elle n’a été utilisée qu’en grande quantité en Corée du Sud et au Japon. Après des années de recherches approfondies menées par différents pays, le comité mixte FAO/ oms d’experts des additifs alimentaires (JECFA) a clairement indiqué dans le rapport de sa 69e session en juin 2008 que la stevia n’a aucun effet secondaire sur le corps humain lorsque l’apport quotidien est inférieur à 4mg/kg de poids corporel. En décembre de la même année, la Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis A approuvé la demande de certification de sécurité et de fiabilité (GRAS) pour les glycosides stévia A de haute pureté (teneur en RA supérieure à 95%) produits sur le marché américain avec un avis «sans objection». Cela marque le début de l’utilisation généralisée de la stévia sur les marchés de l’industrie alimentaire en Europe et aux États-Unis. La stévia, un édulcorant naturel à haute sucré et faible en calories, sera un bon substitut au saccharose [1-3].

2 le progrès technologique

Après plus de 30 ans de production industrielle, le stevia est devenu sa troisième génération: la première génération de stevia est le stevioside, la deuxième génération est un mélange de ST et RA, et la troisième génération est principalement le RA. La douceur et ses caractéristiques sont indiquées dans le tableau 1. Le processus de préparation de la stévia comprend principalement les étapes suivantes: séchage et broyage des feuilles de stévia, extraction en phase liquide, élimination des impuretés, traitement de la résine, séchage par pulvérisation et raffinement.

2.1 Extraction

Les feuilles de stévia au stade initial du bourgeon ont la teneur en stévia la plus élevée. Après que les feuilles à ce stade sont séchées et broyées, l’extraction en phase liquide par solvant polaire est habituellement utilisée pour extraire la stévia, comme l’eau chaude ou l’alcool. L’extraction supercritique du dioxyde de carbone n’a pas encore été appliquée dans l’industrie. Les substances non polaires telles que l’huile, la chlorophylle et les huiles essentielles dans les feuilles peuvent être éliminées avec le chloroforme ou l’hexane avant l’extraction [4-5]. Il existe deux méthodes d’extraction: l’extraction par lots en cuve et l’extraction continue à contre-courant [6] [traduction]. L’extrait de stévia est obtenu en éliminant les feuilles cassées et d’autres impuretés solides par centrifugation, pressage de filtre sur plaque et cadre, et filtration sur membrane [7-8].

2.2 élimination des impuretés

Séparation et purification de la stévia: laExtrait de stéviaContient une grande quantité d’impuretés telles que les protéines, l’acide organique, le tanin, la saponine, le pigment et le sel inorganique. La teneur en ces impuretés est de 5 à 7 fois supérieure à la teneur en glycoside [9]. La chromatographie sur colonne ou la filtration sur membrane est couramment utilisée pour séparer et purifier la stévia de l’extrait de stévia [10-25].

Lors de l’utilisation de la chromatographie sur colonne pour séparer et purifier le stévioside, l’extrait de stévia doit d’abord être prétraité. Autrement, d’une part, les impuretés telles que les pigments dans l’alimentation liquide contamineront la résine, provoquant la résine à adsorber une grande quantité de pigment et de réduire l’adsorption des glycosides, raccourcir le cycle d’adsorption, augmenter la perte d’alcool et de glycosides, réduire le taux d’extraction,  L’augmentation des coûts de production. D’autre part, certains ions métalliques dans le liquide peuvent provoquer une intoxication permanente de la résine, réduisant sa durée de vie et affectant le déroulement normal de la production. Troisièmement, lorsque le produit est utilisé dans la production de boissons, des problèmes tels que la sédimentation et la formation de mousse pendant le remplissage peuvent se produire, ce qui affecte son utilisation répandue.

Par conséquent, l’hydroxyde de calcium et le sulfate de fer sont souvent utilisés comme floculants pour aider à éliminer les impuretés du liquide de stévia. Les sels de Calcium peuvent non seulement former des sels de Calcium insolubles avec des acides organiques tels que l’acide citrique, l’acide tartrique, l’acide succinique, l’acide malique, l’acide ascorbique et l’acide oxalique pour précipiter, mais aussi avec des polyphénols, des protéines, des polysaccharides, des pigments tels que la chlorophylle, le carotène et la lutéine pour former des sels de Calcium insolubles et précipiter. Les sels de fer peuvent précipiter des tanins et des sels métalliques comme le cuivre, le zinc, l’aluminium et le calcium. Après un prétraitement pour éliminer certaines des substances colorées, des protéines et des substances étrangères dans l’extrait de stévia, le stévioside de l’extrait est sélectivement adsorbé par la résine macroporeuse, puis élué avec de l’eau ou un solvant organique. Les sels, la plupart des pigments et d’autres impuretés polaires de l’éluat sont éliminés par des résines échangeuses d’anions et de cations pour obtenir une solution enrichie en stévioside [26].

2.3 traitement à la résine

La recherche sur la purification du stevia liquide à l’aide de résine a commencé en Chine en 1982. En 1984, p. 1.Chen Dechang et d’autres ont établi la première usine en Chine pour purifier la stévia à l’aide de résine dans la ville de Zhenjiang, Province de Jiangsu.

Les résines échangeuses de cations couramment utilisées sont Amberlite IR-120B, 001 14.5, etc., et les résines échangeuses d’anions sont Amberlite IRA-93, D-280, etc. Les résines d’adsorption peuvent être Amberlite XAD-2, AB-8, Diaion Hp-20, ADS-7,D107, D108, etc. [27-30].

Lorsque le stévioside est séparé et purifié à l’aide de la filtration sur membrane, la filtration à travers des micropores céramiques, des membranes d’ultrafiltration et des membranes de nanofiltration peut éliminer les composés ioniques et les molécules organiques avec des poids moléculaires qui diffèrent grandement de ceux du stévioside du liquide de stévia, produisant un liquide enrichi en stévioside [31]. En 1998, le conseil National de recherches du Canada a mis au point une méthode de purification de la stévia par filtration membranaire, qui a été brevetée aux États-Unis [32].

2.4 séchage par pulvérisation

Le liquide concentré peut être soumis à la cristallisation par refroidissement, à la cristallisation par concentration ou au séchage par pulvérisation pour obtenir un produit de stévia brut de couleur foncée avec les principaux composants ST et RA. Le charbon actif peut être utilisé pour décolorer le produit avant la cristallisation ou le séchage par pulvérisation pour obtenir un produit blanc. La plupart des fabricants de stévia en Chine produisent ce type de produit [3] [traduction].

2.5 raffinage

Stévia raffinée riche en RA ou ST: en raison de la différence de solubilité entre ST et RA dans les solvants hydrophiles, la stévia brute peut être dissoute dans un solvant tel que le méthanol ou l’éthanol à une concentration saturée, puis les cristaux de ST ou RA peuvent être précipités sélectivement par des méthodes telles que la concentration et le refroidissement. Pour assurer un RA de grande pureté, les cristaux peuvent être redissous dans une solution d’éthanol-eau, filtrés pour éliminer les impuretés insolubles, puis séchés par pulvérisation ou concentrés pour cristalliser le produit.

3 méthodes d’analyse

L’analyse qualitative et quantitative du stévioside peut être effectuée par colorimétrie, précipitation, chromatographie en phase gazeuse, chromatographie liquide, chromatographie en couche mince et d’autres méthodes. Chine et#39; S norme nationale GB8270-1999 stipule les normes d’essai et les méthodes pour le contenu de ST. Cependant, il n’existe pas de norme officielle pour la détection de la Pr. Le Food Chemicals Codex (FCC) a publié un projet de discussion publique en 2008, qui normalisait la détermination du RA et du ST par chromatographie liquide haute performance. Des colonnes aminées ou des colonnes d’analyse de sucre ont été utilisées comme colonne chromatographique, et une solution mélangée d’acétonitrile-eau a été utilisée comme phase mobile [34].

4 amélioration de la saveur

Le stévioside est principalement utilisé comme édulcorant hypocalorique dans les boissons, les yaourts, les desserts et les édulcorants de table [35]. ST a un certain degré d’amertume et de goût menthol, et ses caractéristiques sucrées ne sont pas parfaites. RA&#Cependant, comme il est plus compliqué de purifier le RA, la stévia contenant 97% de RA a encore un certain goût final de ST. il y a trois façons principales d’améliorer le goût de la stevia.

4.1 ajouter d’autres exhausteurs de saveur pour créer un édulcorant composé

Un édulcorant composé est formé en mélangeant le ST avec d’autres agents de masquage du goût et des exhausteurs édulcorants. En profitant de l’effet synergique entre les différents édulcorants et les caractéristiques physiologiques, il peut réduire les goûts désagréables, raccourcir le temps nécessaire au développement du goût et améliorer la stabilité et la richesse de la douceur. Il peut maintenir les fonctions spéciales d’un seul édulcorant, faire éveiller de nouvelles saveurs et réduire les coûts [36-40].

4.2 augmentation de la teneur en RA de la stévia

Les botanistes ont étudié plus de 220 espèces de plantes de la famille des astéracées en amérique du sud pour tenter de trouver des plantes à plus forte teneur en édulcorants ou de nouveaux édulcorants. Cependant, une seule plante, le Stevia phlebophylla, a été trouvée pour contenir des Stevia rebaudiana Bertoni de type ST. Cette plante a été découverte en 1899 et est maintenant éteinte.

La culture du stévia à haute teneur en RA est pratiquée depuis des décennies, et le Japon est l’un des meilleurs pays pour la recherche sur l’amélioration et l’application des variétés de stévia. En plus de certaines variétés de stévia cultivées par notre pays lui-même, les variétés de stévia utilisées en Chine ces dernières années proviennent principalement du Japon. La variété japonaise Morita, avec son prix relativement bas et ses excellentes caractéristiques de qualité, occupe une part importante du marché du secteur de la plantation de stévia en Chine. Cependant, la variété dégénère sérieusement, ce qui a un impact négatif sur la stabilité et le développement de la source de China' S stevia industrie. L’institut de recherche botanique de Nanjing, la société Qingdao Chuangsheng, Shandong Huaxian Stevia Co., Ltd., Yancheng Xiaguang Stevia Trading Co., Ltd., et d’autres unités en Chine ont également développé des variétés avec une teneur en glycoside plus élevée. Le tableau 2 présente la teneur en stevioside dans les feuilles séchées de certaines variétés de stévia [41-43].

En plus de la sélection de nouvelles variétés pour augmenter la teneur en RA des plantes, des méthodes chimiques pour convertir le ST en RA ont également été signalées [44]. La différence entre ST et RA réside dans le nombre de glucose rattachés à la position C13 du glycoside de steviol (voir Figure 1). La clé pour convertir ST en RA est l’hydrolyse sélective du β-sophoroside et de la liaison terminale de l’éther de sucre de la molécule de stvioside par l’enzyme «Takadiastase Y» extraite du micro-organisme Aspergillus oryzae, pour obtenir le produit Rubusoside. La molécule de glycoside β-sophoroside et la liaison terminal de l’éther glycoside sont sélectivement hydrolysées pour obtenir le produit stevioside, Rubusoside. Le Rubusoside est un autre glycoside diterpène naturel qui peut être extrait de la plante de Rosaceae Rubus suaviss mus. Après élimination du groupe glucose en position C19 par hydrolyse alcaline, un phénylaldéhyde est utilisé pour former un acétal pour protéger les groupes hydroxyle C4 et C6 du groupe glucose en C13. Et les groupes hydroxyle d’acide c19-carboxylique, puis les groupes hydroxyle de C2 et C3 du glucose attaché à C13 et le groupe hydroxyle d’acide carboxylique de C19 sont condensé pour ajouter un groupe glucose, puis l’hydroxyde de baryum est utilisé pour enlever le groupe protecteur dans une solution de méthanol pour obtenir RA.

4.3 modification enzymatique

La modification enzymatique est une autre méthode couramment utilisée pour améliorer le goût de la stévia. En étudiant le mécanisme de production du sucre et en utilisant l’effet catalytique des enzymes, des groupes spécifiques tels que les unités de glucose (Glc) ou de fructose (Fru) sont ajoutés au ST et au RA pour rendre le goût plus proche de celui du saccharose.Stévia enzyme-modifiéeEst environ 100 fois plus sucré que le saccharose [45-47].

(1) (1) En utilisant la α-1,4-glucosidase (par exemple, la cyclodextrine glucanotransférase), des unités de glucose sont ajoutées au stévioside par une réaction d’addition d’α pour améliorer l’arrière-goût de la stévia. Cependant, au fur et à mesure de la réaction enzymatique, le 4ème groupe hydroxyle du glucose lié au stévioside se polymérisera avec le nouveau groupe glucose selon la réaction d’addition α-1,4-formant une longue chaîne de glucose. La douceur du stevioside α-glucosyl résultant est réduite d’environ 45% par rapport à avant modification. La douceur du stevioside α-glucopyranosyl modifié est réduite d’environ 45%. La β-amylase peut être utilisée pour couper et raccourcir les longues chaînes de glucose et améliorer la qualité du produit [48-49].

(2) en utilisant la β-1,4-galactosyltransférase, les disaccharides (par exemple, lactose, α-D-galactose, etc.) qui sont composés de galactose et de glucose peuvent être utilisés comme sources de β-1,4-galactosyl pour combiner un groupe de glucose à la position 13 du squelette de stationnol (appelé 13-G1), ainsi que deux groupes de glucose à la position 13-G1, et les deux unités de glucose liées à la position 13-G1 (appelée 13 -G2, 13 -G3), et les quatre unités de glucose liées à la position 19 du squelette de stationnol (appelé 19 -G1), Sont modifiés en liant une unité de galactose avec une liaison β -1,4 à une à trois unités de glucose, respectivement. En septembre 2007, Dainippon Ink and Chemicals Inc (Dic Fine Chemicals, Inc) a utilisé cette méthode pour préparer les produits dérivés de ST et de RA TPS et GRA, et a obtenu un brevet américain. GRA et GST maintiennent tous deux une douceur élevée, mais ont également une douceur moelleuse semblable au sucre, un bon arrière-goût, et réduisent l’arrière-goût amer de ST [50-51].

(3) la β-fructofuranosidase est utilisée pour hydrolyser le saccharose sous l’action de l’acide phosphorique, introduisant un groupe de fructose dans ST et RA. Le groupe fructose est lié au 6-OH du groupe 19-O-β-glucosyl par une liaison glycosidique β-2,6.

La stévia enzymatique peut concilier efficacement l’arrière-goût du ST, mais elle augmente la consommation de sucre et ne convient pas aux diabétiques.

5 développement national

Le développement de la stévia comestible en Chine a commencé dans les années 1970 au jardin botanique de Nanjing Zhongshan. En 2000, la Chine et#39; les exportations d’extrait de stevia S étaient inférieures à celles des États-Unis.$1 million. Depuis 2006, les exportations se sont accélérées, et en 2009, elles étaient déjà 84 fois supérieures à celles de 2000, avec un volume d’exportation d’environ 2500 tonnes (équivalent à la douceur de 675,000 tonnes de saccharose). Il est exporté vers plus de 10 pays, avec une valeur de production annuelle de plus de 600 millions de yuans. La Chine est devenue le monde et#39; S principaux producteurs et exportateurs de glycosides de stévia [52]. Les fabricants de stévia domestiques sont principalement concentrés dans Shandong, Jiangsu, Anhui, Fujian, Henan et d’autres endroits.

6 Application

Il ya plus de 500 ans, les paraguayens utilisaient déjà la stévia pour faire du thé sucré. Le Stevia a été approuvé comme additif alimentaire en amérique du sud et dans certains pays asiatiques comme la Chine, le Japon et la Corée du Sud au cours du siècle dernier. La Food and Drug Administration (FDA) des États-Unis a publié une notification généralement reconnue comme sûre (GRAS) en 2008, confirmant qu’elle «n’a aucune objection» à l’utilisation du RA comme édulcorant sans calories avec une pureté minimale de 95%.

La France, l’Australie, la nouvelle-zélande et la Suisse ont également délivré des licences d’additifs alimentaires RA. En 2008, le JECFA a annoncé une dja RA de 0-4 mg/kg de poids corporel/jour. Le stévia rebaudiana n’est pas décomposé par les enzymes du tube digestif. Stevia rebaudiana pénètre dans le côlon par l’estomac et l’intestin grêle et est fermenté par des micro-organismes intestinaux pour produire des acides gras à chaîne courte. La valeur calorique de la stévia est générée indirectement par les acides gras à chaîne courte et est d’environ 6,3 kJ/g. La stévia est un édulcorant hypocalorique qui est utilisé dans de nombreux pays pour remplacer le sucre afin de réduire les calories dans les produits laitiers, la crème glacée, les bonbons et les produits de boulangerie.

En outre, l’indigestibilité du stévioside signifie que son apport ne provoque pas d’augmentation du taux de glucose dans le sang, et il ne favorise pas une augmentation du taux d’insuline dans le sang, ce qui le rend approprié pour une utilisation par les diabétiques. En outre, la stévia a une grande valeur médicinale potentielle, avec des fonctions telles que l’abaissement de la glycémie, la prévention de la carie dentaire, le renforcement de l’estomac, et soulager la fatigue. Il a un effet de soutien sur les patients souffrant d’obésité, le diabète, les maladies cardiaques, l’hypertension et l’athérosclérose.

Les principaux composants de stevia, ST et RA, ont une bonne stabilité thermique à l’acide et à l’alcali, et sont très stables à la lumière, que ce soit sous forme de poudre ou de solution. Ils ne moisissent pas et ne se détériorent pas pendant le stockage à long terme, et le produit fini ne brune pas après traitement thermique, comme avec le saccharose. Il peut être utilisé dans les boissons gazeuses, le thé, le vin, le café, les biscuits, les sucreries, le chocolat, les produits laitiers tels que la crème glacée, les jus de fruits et de légumes, les fruits de mer, la viande, les médicaments, les cosmétiques et d’autres produits quotidiens [53].

Le monde&#Les deux plus grandes sociétés de boissons, Coca-Cola et PepsiCo, ont déjà lancé des produits édulcorés à la stevia: Coca-Cola s’est associé à la société agricole Cargill pour développer Truvia, et PepsiCo s’est associé à la société Global Sweetener pour développer PureVia, afin de promouvoir le lancement de boissons hypocaloriques et d’augmenter les ventes de produits.

7 perspectives

Par rapport aux édulcorants traditionnels sans sucre comme l’aspartame, le cyclamate, l’acésulfame et la saccharine, la stévia présente les avantages d’être naturelle, stable et sûre. La culture du stévia a une bonne valeur économique. Le rendement des feuilles de stévia séchées est de 250 à 300 kg par mu, et le prix des feuilles de stévia séchées varie en fonction de la teneur en glycoside. Dans le sud, la stévia peut être récoltée deux fois par an; Dans le nord, les agriculteurs peuvent planter de la stévia en même temps que du blé d’hiver à différentes saisons, ce qui peut effectivement augmenter leurs revenus. L’utilisation de stévia pour remplacer le saccharose ne coûte que 20 à 40% du coût du saccharose. En général, le stévia est pur à plus de 90% et est 250 fois plus sucré que le saccharose dans une solution de saccharose à 2% et 200 fois plus sucré que le saccharose dans une solution de saccharose à 5%.

Le Stevia est utilisé au Japon et en Corée du Sud depuis plus de 30 ans et est largement utilisé dans les boissons, les aliments et les médicaments. Au cours des dernières années, l’utilisation de stévia au Japon a augmenté de 20 à 30%. La Corée du Sud ne se prête pas à la culture de la betterave à sucre et de la canne à sucre et dépend entièrement des importations de saccharose, de sorte qu’il existe une forte demande de substituts de saccharose. Depuis son introduction en 1973, le stevia a conquis 40% du marché coréen des édulcorants, dont la majeure partie est utilisée dans le soju coréen traditionnel. En outre, la quantité de stévia utilisée dans la crème glacée, le chewing-gum, les bonbons, les kimchi, les boissons, les sauces, etc., augmente également. Stevia est en ligne avec today' S consommateurs de «soins naturels, verts, sûrs et de santé». Actuellement, le monde et#Les 500 plus grandes entreprises comme Coca-Cola, Cargill et PepsiCo investissent dans la stévia à l’échelle mondiale, ce qui favorisera grandement le développement de l’industrie de la stévia. En tant que solution de rechange la plus prometteuse au saccharose, le stevia gagnera encore plus de notoriété sur le marché.

Référence:

[1] KinghornAD. Stevi theGenusStevia[M]. Londres :Taylor & Franci 2002.

[2] [traduction] Wang Deji. Sur la douceur, la douceur et l’arrière-goût amer du stevioside [J]. China Food Additives, 2007 (3): 46-53.

[3] Avis de SweetGreenField à theU. S. fodand drug administration (FDA)   Que l’utilisation de rebiana (RebaudiosideA)  Le Stevia rebaudiana est généralement reconnu comme un ingrédient de base. C., grn000282,  2009.

[4] [traduction] Liu J, OngCP,  LiS FY. Extraction sous-critique des édulcorants de stévia à partir de Stevia rebaudiana [J]. Revue de chromatographie, 1997, année de référenceannée de référence   35:446 450.

[5] Wisdom NaturalBrands GRAS evaluation fhigh puritystéviol glycosides[M]. W ashington, D. C.:, GrnMethod pour là - coveryofsteviosides du matériel plantraw [P]. US4892938,   1990.

[6] Yu Jun, Yue Pengxiang, Yu Hong, et al. Etude du procédé d’extraction du stévioside par la méthode à contre-courant à trois étages [J]. Food Science, 2009 (2): 146-148.

[7] [traduction]  KutowyO,   Zhang SQ,  KumarA. Extraction de composés sucrés de Stevia rebaudiana Bertoni[P]. US5972120,  1999.

[8] [traduction] Chen T F. dispositif de filtration liquide [P]. US2005155935, 2005.

[9]Qing Shichen. Exploration des floculants dans la production de stévioside [J]. China Food Additives, 1998 (2): 40-41.

[10] KinghornAD,   SoejartoDD. Actuellement, le stévioside est un édulcorant à usage humain [M]. Les progrès de la recherche sur les plantes médicinales et économiques,   Londres: Academ ic Pres 1985,1:1 -51.

[11] [traduction] Kinghorn A D,   SoejartoD D. Stevioside[M]. Édulcorants alternatifs (2 E edn,  Révision et élargissement). New York:MarcelDekke Inc,   1991:157 à 171.

[12] [en] À propos de BakalA O 'Brien NaborsL,   Stevioside[M].Alternative Sweeteners New York: Marcel Dekke Inc,New York, 1986:295-307.

[13] [en] Phillips K C. Stevi étapes dans le développement d’un nouvel édulcorant [M]. Développement en afrique (3),   Londres: ElsevierAp- Plied Scienc 1987:1-43.

[14] [traduction] JacksonM C,   FrancisG J,  ChaseR g.méthode de production à haut rendement de l’audiodisque pur [P]. US20060083838,  2006.

[15] [traduction] HidejiN,  TadaoM,   TadashiK,    Processus etal de production de bêta  Dérivés de glycosyl stévioside [P]. US4590160,    1986.

[16] [traduction] Dobberstein RH,   Méthode d’extraction des glycosides sucrés sélectionnés La plante de Stevia rebaudiana [ P]. US4361697,   1982.

[17] MagometM,   TomovT,  SomannT,  Fabrication d’un sucrerie et son utilisation [P].US2007082103,  2007.

[18] [traduction] Prakash DuBoisGE,  Royaume-Uni A,   Etal Rebaudioside Composition et procédé de purification du RebaudiosideA [P]. US20070292582,   2007.

[19] [traduction] AbelyanVH,  GhochikyanVT,  MarkosyanAA,   Extraction etale séparation et modification des glycosides doux du steviarebaudianaplant[P]. US2006134292, 2006.

[20] [en] YangM F, HuaJ, un homme QinL. Réaudiographie de haute pureté et méthode d’extraction de la même [P]. US2008300402,   2008.

[21] PayzantJD,   Laïdlerjk,   IppolitoRM. Méthode d’extraction des glycosides sucrés sélectionnés du filtre audiananant [P]. US5962678,   1999.

[22] [en] Miyake T. procédé de production d’un édulcorant [P]. US4219571,   1980.

[23] [en] Persinos g. J. méthode de production du stévioside [P]. US3723410,   1973.

[24] MoritaT,  Fujita IwamuraJ. Composé édulcorant,  Méthode de récupération, Et leur utilisation [P]. US4082858,   1978.

[25] [traduction] KutowyO,   ZhangSQ,  KumarA. Extraction des composés sucrés de Stevia rebaudiana Bertoni[P]. US5972120, 1999.

[26] Chen Shaoqiu, Yang Yinghua, Zhai Zhiqiang. Discussion sur le procédé d’extraction du stévioside [J]. Enseignement et recherche: Journal de l’université agricole de Hebei à Handan, 1991 (3): 1-3.

[27] Chen T H, Zhang Y, Liu X H, et al. Enrichissement et séparation du stevioside A de la stevia par un nouveau type de résine contenant un groupe pyridine. Chinese Science B, 1999, 29 (5): 461-466.

[28] Liu Zonglin, Peng Yijiao, Guo Yang et al. Etude du procédé d’extraction et de cristallisation du stévioside [J]. Food Science, 2002, 23 (8): 99-100.

[29] Shi Zuoqing, Shi Rongfu, Feng Junqian. Extraction en une étape de la recherche d’application de la stevioside sur la résine d’adsorption ADS-7 [J]. China Food Additives, 1995 (2): 18-21.

[30] Hu Jing, Chen Yuru, Wei Xia, et al. Séparation des glycosides de stéviol de la stévia par les résines macroporeuses D107 et D108 [J]. Food Research and Development, 2008, 29 (6): 1-4.

[31] He Changsheng, Wang Bingnan, Zhu Nanshan. Recherche sur l’application de l’ultrafiltration du stévioside [J]. Water Treatment Technology, 1994 (2): 89-94.

[32] Huang Songlian, Chen Tianshun. Influence du pH du charbon actif sur la teneur en stevioside dans la solution d’affinage de stevioside [J]. Food Industry Science and Technology, 2009, 30 (1): 133-135.

[33] [traduction] Plus de J. RebaudiosideA [M]. Le deuxième supplément à FC6:1438.

[34] LindleyM G.Developments in low- calorie sweeteners[J]. Les matières premières et la transformation des dom internationales 2000,   22 (3) : 17-20.

[35] Qing Shichen. Développement et caractérisation d’un produit à base de glycoside de stéviol destiné à la désodorisation [J]. China Food Additives, 1994 (4): 25-26.

[36] Guo Shuqiao, Yang Yuwen, Ni Wanchao. Clonage et analyse bioinformatique du gène de la glucosyltransférase UGT76G2 de stévia rebaudiana [J]. Genomics and Applied Biology, 2009, 28 (3), 422-428.

[37] institut de botanique du Jiangsu, académie chinoise des Sciences. Recherche et application de techniques de sélection et de propagation pour d’excellentes variétés de stévia [M]. 2002.

[38] Yang Y. A stevia plant breeding and improvement process for A new variety [P]. CN03131156. 3, 2003.

[39] KanedaN,  KasaiR,  YamasakiK,   Etudes chimiques etales sur sweetditerpene-glycosidesofStevia rebaudiana: conversion du stevioside en rebaudioside [M]. Produits chimiques et pharmaceutiques TicalBulletin25,    1977, p. 1.   2466-2467.

[40] [traduction] Li Xinhua, Wang Qi, Shi Chen. Étude sur l’effet et le mécanisme de l’action de la glucosyltransférase sur l’amélioration du goût amer de la stevia [J]. Journal of Shenyang Agricultural University, 2009, 40 (5): 605-607.

[41] [traduction] EsakiS,  TanakaR, TanakaR  Kam iyaS. Synthèse et goût de certains glycosides stéviques [J]. Ministère de l’agriculture et de l’agriculture biologique,1984.  48: 1831 -1834.

[42] DuBoisG E BunesLA Dietrich P S édulcorants synthèse et évaluation sensible d’analogues biologiquement stables du stévioside [J]. Revue de chimie agricole et alimentaire, 1984,    32:1321-1325.

[43] [traduction] DuBoisGE, StephensonRA. - synthèse et évaluation sensorielle d’analogues stéviosidiques avec propriétés organoleptiques prouvées. Journal de chimie médicale, 1985, 28:93  98.

[44] MizutaniK,  MiyataT,  KasaiR,   Etude etal sur l’amélioration de la douceur de la transglycosylation enzymatique sélective du glycoside de steviolbisde de la 13 - o-glycosylmologie [J]. Chimie agricole et biologique, 1989, p. 1.   53:395-398.

[45] [traduction] Tanaka O. amélioration du goût des édulcorants naturels [J]. Le ministère de la santé et de l’economie 1997,   69: 675 -683.

[46] [traduction] NishihashiH,  MatsubayashiT,  Katabam il,   Édulcorant etal et procédé pour produire le même [P].US7267835,  2007.

[47] NishibashiH,  MatsubayashiT,  Katabam il,   Méthode etal pour améliorer le goût de l’édulcorant stévia [P]. S58094367,   1983.

[48] [traduction] Xu Zhongwei, Li Na, Ning Zhengxiang. Recherche sur la modification enzymatique de la stevia [J]. Food Science and Technology, 2008, 33 (12): 35-39.

[49] [traduction] Morita T,  Hosono F. Alpha- édulcorant glucosylé de stévia [P]. Télécopieur: H09-107913   1997.

[50] Xu Zhongwei, Shao Peixia, Chen Huayong, et al. Recherche sur la modification du stévioside catalysé par la β-fructosidase [J]. Modern Food Science and Technology, 2008, 24 (11).

[51] Huang Yingsen, Guo Aigui. Développement du stévioside de type r-a [J]. Plant Resources and Environment, 1996, 5 (4): 29-32.

[52] Zhong Shisheng. Idées novatrices pour élargir et renforcer la stevia— rapport sur le développement de l’industrie de la stevia dans le comté de Ganjian [J]. Modern Gardening, 2009 (7): 2-3, 14.

[53] Zhao Yongliang, Zhu Huanling, Liu Jingbin et autres. Étude Comparative du contenu de Rebaudioside A dans les feuilles de stévia d’origines différentes [J]. Anhui Agricultural Science Bulletin (semestriel supérieur), 2009, 15(21): 82-83.