Comment examiner le polyphénol extrait de grenade?

Punica granatum L....... est une planteDe la famille des Punicaceae. C’est une plante à double usage qui est utilisée à la fois pour la médecine Et etla nourriture. Il est originaire de pays d’asie mineure comme l’Iran et l’Afghanistan, et a une histoire de culture de près de 2000 ans en Chine. Le Compendium de Materia Medica enregistre l’efficacité de la grenade dans "arrêter la diarrhée, la diarrhée sanglante, le prolapsus, et les pertes vaginales dans la ménopause." Ses racines, ses feuilles, ses fleurs, ses fruits, ses écorces et ses graines peuvent tous être utilisés en médecine.

L’extrait de grenade contient des polyphénolsAvec des activités physiologiques telles que antioxydant, anti-âge, anticancéreux, antibactérien, hydratant la peau et améliorant la beauté, la baisse de la pression artérielle et la prévention des maladies cardiovasculaires et cérébrovasculaires [1-2]. Ses principaux ingrédients sont l’acide ellagique, le punicalagin, l’acide gaulique, etc. La grenade est une plante médicinale traditionnelle aux propriétés semblables à celles des aliments, et sa valeur médicinale et comestible est de plus en plus appréciée. Cependant, en tant que plante médicinale, il est particulièrement important de sélectionner les ingrédients pharmacologiques appropriés. La sélection du meilleur procédé pour extraire des composants cibles spécifiques a toujours été au centre de la recherche pharmaceutique. Avec le développement de la science et de la technologie, les instruments analytiques sont constamment améliorés, de sorte que plus d’informations sur les composés et une augmentation des types de composés pouvant être analysés peuvent être obtenues en fonction de la sélectivité et de la sensibilité des tests. Un examen des procédés d’extraction et des méthodes d’essai des polyphénols de grenade au cours des dernières années est présenté ci-dessous.

1 recherche sur les méthodes d’extraction

1.1 méthode d’extraction au solvant

La méthode d’extraction au solvant pourPolyphénols de grenadeEst simple, stable et fiable, et convient à l’extraction de la plupart des matériaux médicinaux chinois. Cependant, les solvants organiques sont coûteux et polluants, et leur consommation est élevée. Cette méthode utilise couramment le méthanol, l’éthanol, l’acétone et l’acétate d’éthyle comme solvants. Ces solvants organiques ont une bonne solubilité pour les polyphénols, ne subissent pas de réactions chimiques et sont faciles à séparer. Jia et Al., et al.[3] ont utilisé 20% d’éthanol comme solvant, un rapport liquide/matière de 1:20, et une température d’extraction de 50 °C pendant 1 h, pour obtenir un rendement en polyphénol de 22,86%. Sun et al. [4] ont utilisé 50% d’éthanol comme solvant, un rapport liquide/matière de 25:1 et une température d’extraction de 70 °C pendant 1,5 h, ce qui a permis d’obtenir un rendement en polyphénol de 16,28%. Wang et al. [5] ont examiné les solvants d’extraction pour déterminer la quantité totale de polyphénols provenant du zeste de grenade au Xinjiang, et les résultats ont montré que le rendement en polyphénols était de méthanol et gt; Éthanol > Eau > Acétate d’éthyle.

1.2 méthode d’extraction assistée par ultrasons

L’extraction assistée par ultrasons ne nécessite pas de chauffage, a un taux d’extraction élevé, un temps d’extraction court, est simple et facile à utiliser, et convient à l’extraction de la plupart des ingrédients médicinaux chinois. Cependant, il est difficile d’assurer la sécurité des appareils à ultrasons. Zhao et al. [6] ont utilisé la méthode de surface de réponse pour optimiser les conditions de procédé pour l’extraction par ultrasons dePolyphénols des écorces de grenadeEt la comparait à l’extraction secouante. Le temps d’extraction était de 35 minutes (1/7 du temps d’extraction par secouage), la fraction volumique d’éthanol était de 59%, la puissance ultrasonique était de 90 W, le rendement d’extraction atteignant 321,26 mg/g. Wang et al. [7] ont optimisé le processus d’extraction des polyphénols de la zeste de grenade à l’aide d’une extraction assistée par ultrasons à l’aide d’un plan combiné de régression rotative universelle à deux facteurs: concentration d’éthanol de 50%, rapport matérial-liquide de 1:25, temps ultrasonique de 30 minutes, puissance ultrasonique de 360 W, et le rendement des polyphénols de la zeste de grenade atteignant (21,22 ± 0,06)%.

1.3 extraction assistée par micro-ondes

L’extraction assistée par micro-ondes est économiseuse d’énergie, cause moins de pollution, a une efficacité thermique élevée et ne nécessite pas de prétraitement tel que le séchage, ce qui simplifie le processus et réduit l’investissement. Il est connu sous le nom de «procédé d’extraction vert» et est utilisé pour extraire l’alizarine des plantes et pour effectuer le suivi des processus et le contrôle de la qualité des polymères et de leurs additifs. Cependant, l’équipement est coûteux et peu pratique à entretenir. Song et al. [8] ont obtenu un extrait brut d’une teneur en polyphénol de 19,548 g/100 g dans les conditions optimales d’extraction (40% d’éthanol, puissance d’extraction de 242 W, temps d’extraction de 60 S et rapport matière/liquide 1:5). Liu et al. [9] ont utilisé l’extraction par micro-ondes pourExtrait polyphénols de la peau de grenade....... Et un essai orthogonal a été utilisé pour déterminer le procédé d’extraction optimal sous forme de solution d’éthanol à 30%, un rapport matérial-liquide de 1:20, une puissance d’extraction de 300 W, une température d’extraction de 60 °C, un temps d’extraction de 100 S et un rendement en polyphénol pouvant atteindre 26,91%.

1.4 extraction par fluide supercritique

L’extraction de fluide supercritique est un procédé d’extraction et de séparation utilisant des fluides supercritiques comme solvants. Cette méthode fonctionne près de la température ambiante et est particulièrement adaptée à l’extraction et à la séparation de produits naturels sensibles à la chaleur et à la séparation de substances volatiles. Il est également adapté pour la séparation et l’extraction de substances solides. Son solvant commun est le CO2, qui a d’excellentes propriétés telles qu’une faible viscosité, une haute diffusivité, une haute densité et une forte solubilité. Feng et al. [10] ont comparé l’extraction supercritique de CO2, l’extraction par ultrasons, l’extraction par micro-ondes et l’extraction par macération àExtrait d’acide gallique de la peau de grenade, avec des teneurs respectives de 0,396%, 0,311%, 0,271% et 0,498%. On constate que l’extraction supercritique du CO2 a un rendement d’extraction relativement élevé.

1.5 méthode enzymatique

La méthode enzymatique présente les avantages de conditions d’extraction légères, une sélectivité élevée, un taux d’extraction élevé, la conservation de l’énergie et la protection de l’environnement, un processus simple et réalisable, mais elle a des exigences relativement strictes pour les conditions d’extraction, et la détermination du type d’enzyme et la détermination du pH, de la température et de la concentration optimaux sont relativement strictes. Wang et al. [11] ont utilisé la méthode enzymatique pour étudier les polyphénols dans les écorces de grenade. Une étude à facteur unique A été réalisée pour étudier les effets de différentes concentrations de cellulase, de pectinase, d’enzymes complexes, du temps d’hydrolyse enzymatique, de la température d’hydrolyse enzymatique et du pH de l’hydrolysat enzymatique sur le rendement en polyphénols. Un schéma combiné de régression rotative généralisée à deux niveaux A été utilisé pour optimiser les paramètres du procédé. Les résultats ont montré que les facteurs influant sur le rendement en polyphénols étaient le temps d’hydrolyse enzymatique > Concentration enzymatique > PH > Température d’hydrolyse enzymatique, on a déterminé que le rendement en polyphénol atteignait (23,87 ± 0,08)% lorsque la concentration de qualité de l’enzyme complexe était de 0,25 mg/mL, le temps d’hydrolyse enzymatique était de 150 minutes, la température était de 50 °C et le pH de l’hydrolysat enzymatique était de 6,0. Le taux d’extraction était de 16,84 % supérieur à celui de la méthode au solvant.

2 recherche sur les méthodes de détection

2.1 méthode du furfuraldéhyde

Le principe de la méthode Folin phénol pour déterminer les polyphénols est que la réduction des groupes hydroxyle phénoliques, le nombre de groupes hydroxyle phénoliques et la quantité de substances chimiques colorées formées avec le réactif oxydant sont linéairement liés dans une certaine gamme. Cette méthode présente les avantages d’une faible consommation de réactif, d’un fonctionnement commode, d’une sensibilité élevée et d’une bonne stabilité, mais la préparation du réactif est plus gênante.

Nan et al. [12] ont utilisé l’acide gallique comme norme pour déterminer la teneur en polyphénol des feuilles de goyave. Lorsque le réactif de Folin a été dilué 10 fois, 40% Na2CO3, le temps de réaction était de 7 minutes, et la température de réaction était de 50 °C, il y avait une bonne relation linéaire entre la teneur en polyphénol et l’absorbance dans un délai de 0-500 mg. Du et al. [13] ont utilisé cette méthode pour déterminerTeneur en polyphénol dans les écorces de grenade....... La concentration en réactif était de 0,6 mol/L, 0,150 g/mL de Na2CO3, et la réaction a été effectuée dans l’obscurité à 25 °C pendant 50 min. La longueur d’onde de détection était de 765 nm. Il y avait une bonne relation linéaire entre la concentration d’acide gallique et la valeur d’absorbance de l’ordre de 1 à 6 mg/L. Zhu et al. [14] ont utilisé l’acide gallique comme norme pour déterminer la teneur en polyphénol de l’écorce de grenade. 1,00 mL de réactif Fering, 3,00 mL de 10,0 g/100 mL Na2C03, température de réaction 25 °C, temps de réaction 120 min, longueur d’onde de mesure 672 nm, dans l’intervalle de 10-100 μg/mL, la concentration en acide gallique a une bonne relation linéaire avec l’absorbance.

2.2 spectrophotométrie

La spectrophotométrie est très spécifique, simple et rapide, avec une bonne reproductibilité, mais pas très précise. Il convient à l’analyse qualitative et quantitative de la plupart des ingrédients actifs dans les médicaments à base de plantes chinois. Wang et al. [15] ont utilisé la spectrophotométrie ultraviolette pour déterminer la teneur totale en tanin dans l’écorce de grenade. L’acide gallique a été utilisé comme substance témoin et la longueur d’onde de détection était de 760 nm. Il y avait une bonne relation linéaire avec l’absorbance comprise entre 0,0502 et 0,2526 μg/mL (r = 0,9996). Yang et al. [16] ont utilisé la spectrophotométrie ultraviolette pour déterminer la teneur en acide gaulique, laComposant principal dans la grenade et la pelure de grenade.

Le résultat a montré que le contenu deL’acide gallique dans le zeste de la grenade était légèrement plus élevé que celui de la grenade....... Wang [17] a utilisé la spectrophotométrie pour déterminer la teneur en polyphénol hydrolysé dans l’extrait de graines de grenade et a constaté qu’il y avait une bonne relation linéaire entre la concentration d’acide pyrogallique et l’absorbance de 0,014 à 0,07 mg/mL (r = 0,999 2). La teneur en polyphénol hydrolysé dans l’extrait de graines de grenade était de 7,55 %. Zhang et al. [18] ont utilisé la méthode de la caséine pour déterminer la teneur en tanin dans les écorces de grenade. Les résultats ont montré que la teneur en tanins avait une bonne relation linéaire entre 1,02 et 6,12 g/mL (r = 0,9993), que le taux de récupération de l’échantillon était de 97,4 % et que la Drs Était de 1,21 % (n = 6). Zhou et al. [19] ont comparé les rendements en polyphénol des écorces de grenade à l’aide de différentes méthodes d’extraction en mesurant la teneur en polyphénol par la méthode colorimétrique au tartrate ferrique. Les résultats ont montré que l’extraction assistée par micro-ondes des polyphénols de zeste de grenade dans un système aqueux à deux phases à base d’éthanol-ammonium a un rendement plus élevé.

2.3 électrophorèse capillaire haute performance

Cette méthode présente les caractéristiques d’un rendement élevé de la colonne, d’une vitesse de séparation rapide, d’une sélectivité élevée et d’un instrument simple. Cependant, la reproductibilité de la séparation est affectée par le faible volume d’injection, la mauvaise capacité de préparation, la faible sensibilité et le fait que l’électrophorèse peut varier en fonction de la composition de l’échantillon. Zhou et al. [20] ont utilisé une colonne capillaire non enduite, une solution tampon de 30 mmol/L de butanolate d’ammonium à 30 mmol/L de phosphate dipotassium (20:9), une tension de séparation de 20 kV, une longueur d’onde de détection de 254 nm, une température de colonne de 25 °C et des conditions d’injection de 25 mbar et 5,0 S. La teneur en acide ellagique de l’extrait de la peau de grenade a été déterminée. Le conseil des ministresConcentration de détection d’acide ellagiqueCette méthode est précise et fiable et convient au contrôle de la qualité des médicaments à base de grenade.

2.4 chromatographie liquide haute performance

La chromatographie liquide haute performance (CLHP) est sensible, rapide et précise. En principe, il peut être utilisé pour séparer et analyser les composés organiques ayant un point d’ébullition élevé, une faible stabilité thermique et une masse moléculaire relative ≥400. Cependant, l’échantillon doit être prétraité avant l’injection. Liu et al. [21-22] ont utilisé la chromatographie liquide haute performance en phase inverse (RP-HPLC) pour déterminer simultanément la teneur en acide gallique,L’acide ellagique,Punicalagin et acide ellagique dans le zeste et le jus de grenade. Les quantités d’injection d’acide gallique, d’acide ellagique, de punicalin et d’acide ellagique étaient de l’ordre de 0,020 à 0,320 μg, de 0,038-0,608 μg, de 0,074 à 1,184 μg, de 0,039 à 0,624 μg, et les concentrations montrent une bonne relation linéaire avec les zones de pointe respectives (r est de 0,999 7, 0,997 1, 0,997 8, et 0,999 4, respectivement). Elle peut être utilisée comme méthode de détection des quatre composants de polyphénol dans le jus et le zeste de grenade. Ding et al. [23] ont déterminé la teneur en acide ellagique dans l’extrait de pelure de grenade par CLHP.

Dans les conditions optimales de détection,L’acide ellagique avait une bonne relation linéaireAvec l’aire de crête dans la gamme de 5,36 à 171,40 μg/mL, de sorte qu’il peut être utilisé pour déterminer la teneur en acide ellagique dans l’extrait de pelure de grenade. Lei et al. [24] ont utilisé la CLHP pour déterminer la teneur en acide ellagique dans le plasma de rats après administration orale d’extrait de feuille de grenade. Les résultats ont montré que l’acide ellagique chez les rats était distribué selon un modèle à deux compartiment, avec une faible concentration sanguine par voie orale, la plus grande partie étant absorbée par l’estomac, un court laps de temps avant le pic, une absorption rapide, une distribution et une élimination rapides. L’absorption de l’acide ellagique des feuilles de grenade était supérieure à celle de l’acide ellagique lui-même.

Luo et al. [25] ont utilisé la RP-HPLC pour déterminer simultanémentTeneur en punicalin et en acide ellagiqueDans un extrait de comprimé effervescent vaginal de la peau de grenade. La Punicalin avait une bonne relation linéaire dans la gamme de 0,098-0,610 mg/mL (r = 0,999 1), l’acide ellagique dans 0,011 ~ 0,060 mg/mL (r = 0,999 8) a une bonne relation linéaire. Cette méthode est précise, simple et a une forte spécificité. Il établit une méthode pour le contrôle de la qualité des comprimés effervescents vaginaux extraits de la peau de grenade. Li et al. [26] ont utilisé la RP-HPLC pour déterminer le composant du tanin punicalagin dans les écorces de grenadiers, et la quantité de punicalagin a été jugée élevée (10%), ce qui est conforme à la norme d’au moins 10% de la fraction en masse du tanin stipulée dans l’édition 2005 du People' pharmacopée de la république de Chine. Parida Abliz et al. [27] ont utilisé la CLHP pour déterminer la teneur en acide gallique dans la pelure de grenade du Xinjiang, qui présentait une bonne linéarité de l’ordre de 9 à 90ml, ce qui indique que la méthode est précise et fiable.

2.5 chromatographie liquide - spectrométrie de masse

La chromatographie liquide et la spectrométrie de masse (LC-MS) combinent les puissantes capacités de séparation et d’analyse de la chromatographie liquide (LC) avec les capacités sensibles d’identification et d’analyse structurelle de la spectrométrie de masse (MS), fournissant ainsi une masse moléculaire relative fiable et précise et des informations structurelles. Xu et al. [28] ont utilisé LC-MS pour identifier lesPrincipaux polyphénols dans le jus naturel de grenade....... Les résultats préliminaires des analyses ont montré que le jus de grenade contient de l’acide ellagique, de la punicaline, de l’apigénine, de l’apigénine 7-o -β-D-glucopyranoside, de la rutine, de 3,3',4&#,5,7-pentahydroxyflavanone, et 3,3',4&#Cette sous-position ne comprend pas les produits suivants: Begoia cerd et al. [29] ont établi une technique d’analyse HPLC-MS-MS pour détecter la biodisponibilité et les métabolites du principal composant du polyphénol de grenade, le punicalagin, chez les rats. C’était le premier rapport d’absorption des ellagitannines dans le plasma.

2.6 autres

Tang et al. [30] ont utilisé la méthode complexométrique pour déterminer la teneur enTanins en écorces de grenadeEt a constaté que la teneur en diverses substances polyphénols dans différentes variétés d’écorces de grenade était significativement différente. Wang et al. [31] ont utilisé la méthode du bleu de prusse pour déterminer la teneur en polyphénols de huit types de fruits comme la grenade. Les résultats ont montré que la teneur en polyphénols et en tanins de l’extrait était positivement en corrélation avec ses propriétés antioxydantes. Zeng et al. [32] ont utilisé la méthode de l’acide phosphomolybdique et de la caséine pour déterminer la teneur totale en tanin dans l’écorce de grenade. Cette méthode présente les caractéristiques d’une forte spécificité, d’une opération simple et facile, de résultats stables et d’une bonne reproductibilité. Ji et al. [33] ont utilisé l’électrophorèse capillaire pour détecter simultanément les deux composants de l’acide ellagique et de la punicaline dans l’extrait de peau de grenade. Comparativement à la CLHP, le test ta montré que la différence entre les deux groupes de données n’était pas statistiquement significative, et les coefficients de corrélation des deux méthodes étaient tous deux > 0,998, ce qui indique une bonne précision.

3 résumé

Actuellement, il existe plusieurs méthodes pourExtraction des polyphénols de grenade, y compris l’extraction par solvant, l’extraction assistée par ultrasons, l’extraction assistée par micro-ondes, l’extraction par fluide supercritique et les méthodes enzymatiques. Parmi eux, la méthode d’extraction au solvant est une méthode traditionnelle d’extraction des polyphénols de grenade, qui est la plus largement utilisée. Le procédé est relativement simple, stable et fiable, mais les solvants organiques sont fortement consommés, ce qui est coûteux et polluant. L’extraction assistée par ultrasons est plus économique en temps et en énergie que la méthode au solvant, avec un taux d’extraction élevé et une vitesse d’extraction rapide, et est largement applicable. L’extraction de fluide supercritique possède d’excellentes propriétés de transport, une forte perméabilité, un taux d’extraction élevé et des conditions de fonctionnement douces. Particulièrement approprié pour séparer les substances sensibles à la chaleur, mais un grand investissement en capital unique, un faible rendement du produit, et seulement applicable à l’extraction de quelques ingrédients; L’extraction assistée par micro-ondes permet d’économiser de l’énergie, du travail et du temps, est respectueuse de l’environnement et est une technologie durable; Les réactions enzymatiques sont très spécifiques, des conditions douces, des taux d’extraction élevés, vertes et économes en énergie, et ont un grand potentiel de développement. Bien entendu, des recherches supplémentaires sont nécessaires pour trouver la meilleure méthode d’extraction, de séparation et de purification des polyphénols de grenade.

A l’heure actuelle, les principales méthodes de détermination de laTeneur en polyphénol des grenadesInclure la méthode Folin phénol, la spectrophotométrie, l’électrophorèse capillaire à haute performance, HPLC, RP-HPLC, et LC-MS. La méthode Folin phénol est très sensible, mais moins spécifique; La méthode de spectrophotométrie est très spécifique, rapide et stable, et a une bonne reproductibilité, mais est moins sensible; La méthode d’électrophorèse capillaire haute performance a une efficacité de colonne élevée, une séparation rapide, un petit volume d’injection, une faible consommation de réactif; HPLC a les caractéristiques de la haute pression, du rendement élevé, de la grande vitesse, de la sensibilité élevée, et d’un large éventail d’applications. Cependant, en raison des limites de l’efficacité des colonnes, il est couramment utilisé pour quantifier simultanément un ou deux composants et ne convient pas pour déterminer simultanément plusieurs composants; La technologie LC-MS est devenue l’une des méthodes de séparation et d’identification les plus importantes aujourd’hui en raison de ses puissantes capacités d’analyse et d’identification. Il joue un rôle encore plus important dans le domaine de la chimie analytique, mais son équipement est coûteux et nécessite des opérateurs hautement qualifiés, de sorte qu’il n’est pas encore largement disponible.

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